Влияние воды на анализы в результате загрязнений.

Исследования проводились для оценки влияния различных загрязнения воды на три иммунометрических («сэндвич») анализа (TSH, Sensetive PSA, hCG) и один конкурентный тест, Тестостерон. Данный выбор обусловлен данными, что эти исследования наиболее часто подвержены влиянию качества воды на результаты анализов. Влияние воды на анализы IMMULITE 1000 и IMMULITE 2000.

Влияние воды на анализы: Соли

Исследовано влияние следующих солей:

Ацетат магния, хлорид кальция, ацетат цинка, хлорид железа, хлорид натрия, фосфат натрия, сульфат натрия. В концентрациях соответствующих концентрациям в системах очистки было отмечено значительное увеличение CPS нижнего калибратора для сэндвич анализов всех солей, за исключением хлорида цинка. При 1мг/Л, Mg⁺², Ca⁺², Fe⁺³ оказывают влияние на уровень сигнала нижнего калибратора, Zn⁺², SO₄^-2, F^—, Na⁺, Cl^— не оказывают. При таких концентрациях вода имеет удельное сопротивление 0.05 – 0.5 МОм*см. Наибольшее влияние на CPS нижнего калибратора оказывают ионы Mg⁺². При концентрациях менее 0.03 мг\Л CPS нижнего калибратора hCG увеличилось на 15%. В больших концентрациях Mg⁺² также оказывал влияние на CPS верхнего калибратора. Другие анализы были менее чувствительны к магнию чем hCG.

Выводы: ионы солей оказывают одинаковое влияние на сигнал нижнего калибратора для всех трех исследованных сэндвич анализа. Увеличение CPS нижнего калибратора приводит к значительному увеличению параметра калибровки «пересечение». Конкурентный тест не был подвержен влиянию солей.

Также ионы в воде влияют на значение контролей для всех анализов. Для всех тестов ионы в воде увеличивают значение нижнего контроля. Контроли высших уровне не подвержены влиянию солей.

Влияние воды на анализы: Силикаты (SiO2)

Растворенные в воде силикаты достаточно плохо поддаются очистке, из за слабой ионизации кремния в нейтральной среде. Типичные концентрации силикатов составляют 25 мг SiO2/л в исходной воде и 0.05, 0.1,1 мг SiO2/л в воде Тип I, Тип II и Тип III соответственно. При низких концентрациях силикаты не влияют на тесты IMMULITE.

Влияние воды на анализы: Хлор

Типичная концентрация хлора в хлорированной воде составляет до 3 мг\л. Хлор проникает через систему очистки если фильтры предназначенные для абсорбции хлора выработали свой ресурс. При концентрациях хлора которые влияют на качество результатов – хлор можно определить по запаху. Небольшие концентрации не влияют на качество результатов.

Влияние воды на анализы: Органическое загрязнение

Наличие органических загрязнений может быть определено с помощью теста на содержание углеродов, жидкостной хроматографии высокого разрешения. Влияние органических примесей на тесты не исследовалось.

Влияние воды на анализы: Микробное загрязнение

Микроорганизмы размножаются при хранении воды, или неправильном обслуживании системы очистки воды. Одним из субпродуктов жизнедеятельности микробов является щелочная фосфатаза. Вода, загрязненная щелочной фосфатазой имеет значительное влияние на результаты тестов IMMULITE. Субстрат может реагировать на присутствие 10^–21моль щелочной фосфатазы. Данное загрязнение может быть легко удалено с помощью процедуры очистки системы. Если вода из источника не проходит тест воды, система очистки должна пройти профилактическое обслуживание или данный источник не следует использовать для выполнения тестов.

С помощью процедуры WATERTEST можно определить только наличие щелочной фосфатазы. Другие загрязнения не определяются данной процедурой. Те же 4 теста были протестированы с водой из загрязненного источника. Результаты WATERTEST для данной воды были приемлемыми. Данная вода повысила значения нижних калибраторов на величину от 60% до 350% и немного повысила значения верхних калибраторов для сэндвич анализов. Влияние на значения контролей было очень значительным. Нижний уровень трехуровневого контрольного материала был снижен на 90% у PSA. Другие уровни контролей были подвержены влиянию для всех протестированных анализов.

Удаление бактерий с помощью целлюлозно-ацетатного фильтра 0,22 мкм не приводит к стабилизации сигнала нижнего калибратора и контролей. Так как результаты теста воды приемлемы, загрязнение обусловлено субпродуктами грамм-отрицательных бактерий, а не щелочной фосфатазой. Несмотря на то, фильтр финальной очистки физически удаляет бактерии, субпродукты жизнедеятельности этих бактерий влияют на результаты анализов.

Изменения pH воды

Иммунологические, и особенно хемилюминисцентные реакции в IMMULITE 2000 требуют определенной PH воды. Именно поэтому реагенты готовятся из буферов для компенсации некоторых различий pH воды, добавляемой в реакцию. Однако вода для промывки не является буфером. Щелочная фосфатаза, используемая как метка в системе IMULITE имеет оптимальную активность при pH 9,5-10,5. Низкая pH воды для промывки может уменьшать активность метки, а следовательно уменьшать значения измеренных CPS.

Исследование влияния pH воды в диапазоне pH 3-8,2 на результаты тестов IMMULITE/ Наиболее подвержены влиянию CPS калибраторов сэндвич анализов. Сигнал высоких калибраторов уменьшался, если значения pH были ниже 4. При pH 3 сигнал высокого калибратора был снижен на 50% у hCG и sPS и более чем на 85% у TSH. Для TSH сигнал нижнего калибратора увеличивался если pH был менее 5.5 и был вдвое больше при pH 4. Калибраторы ТТЕ не были подвержены влиянию pH 4.0. При низких значениях pH сильно изменялись нижние уровни контрольных материалов.

Обычно вода после системы очистки имеет кислотность pH 5.5-6.0. Можно сказать, что pH 5.0 и ниже неприемлемы для выполнения тестов. Хотя сама по себе кислотность pH 5.0 не оказывает большого влияния на результаты, органические и неорганические соединения, которые являются причиной низкого pH могут влиять на реакцию.

Как определить загрязнения

Наиболее просто решаются проблемы с загрязнением щелочной фосфатазой. Для определения ее наличия в используемой воде системы Immulite имеют тест воды WATERTEST. Но даже если загрязнение не связано с щелочной фосфатазой, результаты калибровок и контроля качества могут помочь сделать заключение, что влияет на результаты именно качество используемой воды.

Результаты калибровки используют для исследования проблемы, даже если они проявляются на результатах контрольных материалов. Калибраторы – известный материал, с прогнозируемыми значениями. Если в системе существуют проблемы с качеством воды – это часто отражается на параметре калибровки «intercept». Одно из проявлений загрязнения воды – это высокие абсолютные значения intercept для сэндвич анализов. У них очень низкие CPS нижнего калибратора. Дополнительные CPS которые дает загрязненная вода будут отображаться на результатах нижнего калибратора. Наиболее подходящие анализы для выявления загрязнения как щелочной фосфатазой, так и другими загрязняющими веществами- hCG, CEA, AFP, и PSA.

Значения cps нижнего калибратора TSH также увеличиваются при наличии загрязнения щелочной фосфатазой. Необходимо сравнивать полученные CPS нижнего калибратора, с заявленными в информации о наборе. Необходимо также учитывать поведение калибраторов для данного набора в прошлом. Перед тем как определить, что причиной нестабильности получаемых результатов является плохое качество воды необходимо исключить возможность изменившихся характеристик набора из-за длительного использования, или особенностей данного прибора. А также необходимо проверить условия хранения и сроки годности всех реагентов для данного теста.

Результаты контроля качества могут быть подвержены изменениям по ряду причин. Перечисленные ниже причины наблюдались в различных случаях, однако возможны и другие причины нестабильных контрольных материалов.

Причины нестабильных контрольных материалов

Сразу после калибровки результаты контролей находятся в допустимых пределах, но в течении короткого периода в пределах интервала калибровки контроли «плывут». Калибровка используется для компенсации разницы между конкретным прибором и прибором, который использовался для построения мастер-кривой. Если вода имеет загрязнения и оператор повторяет калибровку набора из за плохих контролей, плохое качество воды временно компенсируется свежей калибровкой. Поведение системы будет следующим: результаты контроля стремятся к среднему во время калибровки и постепенно снижаются (или повышаются в зависимости от типа исследования) до следующей калибровки.
Для конкурентных тестов, повышенные CV контролей попадающих в нормы сразу после калибровки. Затем плавное смещение результатов в течении интервала рекалибровки может говорить о загрязненной воде.
Коэффициент вариации контролей HCG может быть повышен. Это может быть единственный тест, на котором наблюдается такой эффект.
Если происходит замена загрязненного источника воды на другой, не загрязненный, но сам прибор не проходит процедуру очистки, контроли (и калибровка) запущенные в этот день могут оказаться неточными. После небольшого периода работы, когда произойдет естественная промывка системы чистой водой, возможна стабилизация контролей и калибраторов. Однако если не провести процедуру очистки системы – проблема может вернуться.

Очень редко бывает, что при проблемах с водой загрязнен только инструмент. Промывка прибора без исследования состояния источника воды очень редко решает проблему в целом. Обычно это только откладывает решение проблемы. Бутыли для воды могут быть загрязнены. Если после смены источника воды проблема исчезла, значит, однозначно, причиной плохих результатов были загрязнения в воде. Если одновременно с заменой источника была проведена очистка системы и проблема решена, невозможно точно определить, в чем была причина плохих результатов.